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看完本文,對(duì)Bio-Rad_PTC-200 PCR儀有一個(gè)新認(rèn)識(shí)
更新時(shí)間:2022-03-24   點(diǎn)擊次數(shù):1270次
   Bio-Rad_PTC-200 PCR儀可以根據(jù)不同的DNA的片段及其引物,設(shè)計(jì)不同的擴(kuò)增條件,從而實(shí)現(xiàn)樣本DNA在Taq酶的作用下達(dá)到指數(shù)性的增長(zhǎng)。廣泛應(yīng)用于序列測(cè)定、遺傳分析、醫(yī)療診斷等樣品的前處理。
  
  PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。PCR擴(kuò)增儀又稱為PCR基因擴(kuò)增儀、PCR核酸擴(kuò)增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴(kuò)增儀,是利用PCR(Polymerasechainreaction,聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)對(duì)特定DNA擴(kuò)增的一種儀器設(shè)備,被廣泛運(yùn)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中,例如用于判斷檢體中是否會(huì)表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制以及親子鑒定等。
  
  Bio-Rad_PTC-200 PCR儀反應(yīng)步驟:
  分別是:1.Denaturation2.Annealingofprimers,3.Extensionofprimers。所謂Denaturing乃是將DNA加熱(至90~95℃)變性,將雙股的DNA加熱后轉(zhuǎn)為單股DNA以做為復(fù)制的模板.而Annealing則是令Primers于一定的溫度下(冷卻至55~60℃)附著于模板DNA兩端。最后在DNA聚合酶e.g.Taq-polymerase的作用下(加熱至70~75℃)進(jìn)行引物的延長(zhǎng)Extensionofprimers及另一股的合成。
  
  PCR的最早設(shè)想核酸研究已有100多年的歷史,二十世紀(jì)60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術(shù),Korana于1971年最早提出核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想:"經(jīng)過(guò)DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復(fù)該過(guò)程便可克隆tRNA基因"。
  
  PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴(kuò)增,加熱使雙鏈DNA解開(kāi)螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復(fù)“變性→退火→引物延伸”過(guò)程至25~40個(gè)循環(huán),呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)大待測(cè)樣本中的核酸拷貝數(shù)。
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